研究人員利用生物3D打印模型來研究乳腺癌腫瘤異質性

南極熊導讀：在《科學報告》最近發(fā)表的一項研究中，研究人員開發(fā)了一種乳腺癌腫瘤微環(huán)境 (TME) 的3D生物打印體外模型，該模型由分散在水凝膠中的同時培養(yǎng)的細胞組成，并采用受控設計來評估腫瘤異質性。

△通過這種模型，可以模擬和控制不同類型的腫瘤細胞在同一環(huán)境中的共存情況，以更好地研究和理解腫瘤的異質性。這有助于我們更深入地了解腫瘤的復雜性和治療方案的設計

研究背景

乳腺癌是女性最常見的癌癥，也是第二常見的癌癥。腫瘤異質性導致其侵襲性，細胞間和細胞-腫瘤微環(huán)境相互作用在腫瘤侵襲和進展中發(fā)揮著至關重要的作用。

利用芯片器官平臺來研究乳腺癌的異質性的研究有限。有效的模型必須涵蓋腫瘤異質性才能準確研究癌癥進展。

△( A ) 生物制造過程的示意圖，( B ) 打印機和生物打印結構（用于說明目的的食用色素）

關于該研究

在這項研究中，研究人員開發(fā)了一種使用3D生物打印平臺來模擬腫瘤中不同細胞定位所產(chǎn)生的表型異質性的方法。他們創(chuàng)建了一個框架，用于對腫瘤中不同細胞定位或與腫瘤微環(huán)境相互作用導致的表型異質性進行建模。

為了實現(xiàn)這一目標，研究人員使用具有間質特征的三陰性乳腺腫瘤細胞、乳腺腺癌細胞系和非癌性乳腺上皮細胞，將它們植入明膠-海藻酸鹽水凝膠中。然后，他們使用多墨盒擠出型生物打印機以特定的初始位置、結構和受控的密度創(chuàng)建細胞異質樣本。乳腺癌細胞被封裝在水凝膠中，并使用生物打印機進行打印，構建3D腫瘤模型以模擬體內微環(huán)境。研究人員選擇了適合共培養(yǎng)測試的最佳水凝膠。

為了誘導細胞異質性，研究小組隨機混合細胞或將它們排列在連續(xù)的層中。研究人員創(chuàng)建了一種逐漸變化的化學梯度，用于分析MCF10A細胞在不同比例上存在的上皮生長因子趨化劑的方向上的細胞遷移。

研究人員進行了可打印性和細胞活力研究以改進生物墨水。他們使用單獨的壓力和速度控制來控制每個打印頭的材料流量，并使用各種水凝膠組合物和印刷壓力的組合來研究明膠-海藻酸鹽水凝膠的打印適性。

通過使用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物（MTT）對活細胞和死細胞的細胞活力進行評估，研究人員在生物打印后立即以及四天、七天和十一天后對細胞活力進行了研究。他們還使用激光掃描共焦顯微鏡研究了構造，并通過流變測試評估了水凝膠的彈性和粘性模量。

此外，研究人員還創(chuàng)建了一種樹狀梯度發(fā)生器，可以與芯片上的腫瘤模型的生物3D打印打印相結合。該模型的長度為45毫米，寬度為21毫米。微流體梯度發(fā)生器是使用標準光刻技術構建的。

△該論文研究題目為“通過3D生物打印腫瘤芯片模型控制共培養(yǎng)系統(tǒng)中的腫瘤異質性”（傳送門）

研究結果

該方法利用生物打印技術可以精確控制共培養(yǎng)系統(tǒng)中細胞的位置和排列，從而實現(xiàn)不同腫瘤設計。使用22G噴嘴進行生物打印時，需要較小的擠出壓力，這對細胞存活有利。根據(jù)活死細胞測定結果，生物打印后立即存活的MDA-MB-231乳腺癌細胞的比例在不同的水凝膠結構中分別為94%、85%、97%和76%。

水凝膠結構具有互連的多孔結構，可以保證結構內部的營養(yǎng)擴散，為活細胞提供充足的環(huán)境，并允許廢物從結構中擴散。研究團隊在打印后立即觀察到構建體內部具有良好的細胞分散性，吸光度值為0.9。隨著時間的推移，吸光度值逐漸升高，說明細胞的存活率增加。然而，在第11天觀察到吸光度值為2.1，表明細胞增殖率開始下降。

在第7天到第11天之間，這些結構達到了細胞宿主的最大容量，一些細胞因此死亡。研究結果表明，3D生物打印水凝膠結構具有生物相容性，可以使細胞長時間存活。最初的生物打印結構層包含MDA-MB-231乳腺癌細胞，而后續(xù)層包含MCF7乳腺癌細胞，并放置在初始層之上。

△生物打印MDA-MD-231細胞的均勻分布和活力

與室中心相比，2D室邊緣附近的細胞群和細胞比例有所不同，但腫瘤細胞均勻地分布在3D生物打印結構中。共培養(yǎng)的三維打印結構的成像顯示，自第一天打印以來，兩種乳腺癌細胞類型隨機存在于所有層中，三天后，細胞開始形成簇。MCF7細胞似乎更容易遷移到MDA-MB-231，因為鑒定出的混合細胞簇中MCF7細胞比例更高。

MDA-MB-231乳腺癌細胞比MCF7細胞更快地向EGF趨化劑遷移。當癌細胞與非癌細胞的比例為1:1時，遷移傾向最大。高擠出壓力會對細胞施加更大的剪切應力，因此非常粘稠的水凝膠會導致細胞活力降低。MTT結果顯示，一周內的存活率相比于第一天有所上升，這證實了細胞對營養(yǎng)和氧氣的可及性。

△所提出的芯片上癌癥模型的摘要

研究結論

總體而言，研究結果表明，通過將3D生物打印和微流體設備相結合，可以制造出具有典型獨特腫瘤結構的模型。這些模型可以幫助我們更好地了解異質腫瘤及其微環(huán)境中癌細胞的活性，以更高的時間和地理分辨率觀察和研究它們的行為。此外，這些模型還可能提供重要信息，用于預測腫瘤轉移的時間。